1.1.- Extracción de fracciones enriquecidas en proteínas de membrana externa (PME).
1.2.- Caracterización de PME mediante SDS-PAGE y electroforesis bidimensional.
1.3.- Estudio de las PME reguladas por anaerobiosis y otras condiciones ambientales (disponibilidad de oxígeno, pH, osmolaridad y temperatura).
1.4.- Purificación y caracterización de porinas.
(a) Regulación de su expresión bajo distintas condiciones ambientales (pH, osmolaridad, anaerobiosis y temperatura).
(b) Determinación de propiedades inmunogénicas (inducción de inmunidad humoral y celular en humanos).
2.- MECANISMOS MOLECULARES DE PATOGENICIDAD DE Salmonella typhi.
2.1.- Estudio de genes relacionados con los procesos de invasión y proliferación en células epiteliales y macrófagos de orígen humano.
(a) Generación de cepas mutantes mediante el uso de transposones (MudJ, TnphoA, Tn10, T-POP, etc.), reemplazo alélico (método de Datsenko y Wanner) e inactivación génica mediante inserción de vectores suicidas (pGP704).
(b) Selección de mutantes reguladas por distintas condiciones ambientales (pH, osmolaridad, anaerobiosis y temperatura).
(c) Caracterización genética de las mutaciones (estudios de regulación transcripcional, mapeo, etc.).
(d) Estudios de invasión y proliferación in vitro usando líneas celulares humanas.
(e) Estudios de virulencia in vivo en ratón.
2.2.- Porinas como factores de patogenicidad.
(a) Estudios in vitro usando líneas celulares humanas y murinas (macrófagos y células epiteliales).
(b) Estudios in vivo en ratón.
3.- DISEÑO DE UNA VACUNA ORAL ANTI-TÍFICA.
